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抗体作りにまつわるエトセトラ

1 :名無しゲノムのクローンさん:02/10/23 04:10
やっぱ外注しまくりなんですか?
2ちゃんねるのスパーサイエンティストのご歴々は。

2 :名無しゲノムのクローンさん:02/10/23 07:58
2ゲト

3 :名無しゲノムのクローンさん:02/10/23 09:02
3ゲト

4 :::02/10/23 09:59
アメリカみたいに労働力やすくないし

5 :名無しゲノムのクローンさん:02/10/24 21:08
合成ペプチドって高い?

6 :名無しゲノムのクローンさん:02/10/25 00:32
自分で作れる奴の方がスーパーサイエンティストだな

7 :名無しゲノムのクローンさん:02/10/25 01:18
バカでも作れると思うが。。

8 :マウス:02/10/25 02:14
つくるのはおれ。

9 :名無しゲノムのクローンさん:02/10/25 02:18
ウェスタンにしか使えません。了

10 :名無しゲノムのクローンさん:02/10/25 11:10
IgMしかとれんかった....
かなしいわ

11 :名無しゲノムのクローンさん:02/10/25 19:31
抗原に作ったfussion proteinしか認識しません。

12 :名無しゲノムのクローンさん:02/10/25 22:58
×fussion
○fusion

しかも、fusion proteinが認識されるなら問題無しだろ。

13 :ユカリ:02/10/25 23:10

プランテック製の「 RX-2000V 」を改造済み
にした、アイティーエス製の「 RX-2000V 」↓
http://user.auctions.yahoo.co.jp/jp/user/neo_uuronntya#.2ch.net/

現在、本当に人気がある様です。
≪宣伝ではありません≫

関連ホームページ↓
http://www.h5.dion.ne.jp/~gekitoku/
http://www.h4.dion.ne.jp/~gekiyasu/
http://www.h5.dion.ne.jp/~gekirea/
http://www.h4.dion.ne.jp/~shinsetu/
http://www.planning-instigator.com/silentpeople/best/index2.html

14 :名無しゲノムのクローンさん:02/10/25 23:12
>>12
恐らくtagとモノのつなぎ目の所を認識してるって言いたいんだろ。11は。
11の日本語が足りないみたいだけど。

俺の所はモノクロもポリクロも自前だよ。確かに手間だけどね。


15 :名無しゲノムのクローンさん:02/10/26 01:38
>>14
血抜くの恐いんだけど

16 :あげ:02/10/26 02:04
>>15
ウサギか? ネズミか? どっちもやだけどね。

17 :名無しゲノムのクローンさん:02/10/26 04:31
>12,14
内在性のものが染まらないなんてよくあることだと思うが・・・。



18 :12:02/10/26 10:25
17さんの気分で書きました。
スぺルミスは人生の過ちです。
>15 をれは注射で腹が膨れていく感じがいやです。

19 :名無しゲノムのクローンさん:02/10/27 15:07
>14
fusion proteinしか認識できないのは
内在性のタンパク質が糖鎖修飾なんかされてたり
高次構造を取ったときにエピトープ部位がマスクされて認識できないんだと
思ってた。
ポリクロなのにつなぎ目の所を認識する抗体しか作られてないのって
あまりなくない?

20 :名無しゲノムのクローンさん:02/10/30 15:45
>>19
そうだね。11がモノかポリかどっちを作ったのか分からんけど。
ポリクロだったらまあ結構少ない事例だと思うけどね。
免疫するときにnativeなモノを使うと、westernで認識が凄く弱い
と言う事はあったな。

21 :age:02/11/09 17:46
age

22 :名無しゲノムのクローンさん:02/12/19 09:28
native注射して、マウスとホモロジーが99%でも、
抗体できます?

23 :名無しゲノムのクローンさん:02/12/19 10:18
まあ、生物間でアミノ酸置換が1−2個しかないような
タンパク質でも抗ユビキチン抗体や抗カルモジュリン抗体でも
作製できんだから、上手く逝くだろう>22

24 :名無しゲノムのクローンさん:02/12/19 23:40
ウチは外注だから、「抗体作らせにまつわる・・・」だな。

25 :名無しゲノムのクローンさん:02/12/20 08:31
>19, 20
12の人が書いてるのは,fusionさせたタグなりキャリア蛋白質の抗体しか
出来なかったってことじゃないかな.
ポリクロでも,fusionさせた目的じゃない方の抗体しかできないことは良くあるよ.
自分は,fusionタンパク質を抗原にする時には,切って使ってます.

26 :名無しゲノムのクローンさん:02/12/22 14:19
(1) 自分で作る抗原は普通大腸菌リコンビナントを使う
(2) そのときdenaturing conditionで取られたものをそのまま抗原にしてよい
(3) Hisタグ(pQEのようにHis x6のみ)で抗原を取れれば、タグに対する抗体はできにくい
正誤を教えてもらえないでしょうか。抗体の用途にもよるかもしれませんが。

27 :名無しゲノムのクローンさん:02/12/23 00:24
>26
大腸菌で発現して精製するのが面倒じゃないならその方がいい。
まあ、生体内での発現量が多そうなタンパク質を認識する抗体なら
合成ペプチドを抗原にしてもウエスタン、染色、免沈に使える
抗体ができると思うけど。
変性してても大丈夫かどうかは運次第。可溶化してる方がいいと
言われてるがおれの経験ではゲルから切り出しても普通にできる。
おれはいつも抗原はHisタグ付きで、精製の時にGSTやMALを使う。
ちなみに哺乳類を相手にしている。
線虫やハエが相手なら、GSTついてても平気じゃねーか?


28 :山崎渉:03/01/11 13:40
(^^)

29 :山崎渉:03/01/18 13:17
(^^)

30 :名無しゲノムのクローンさん:03/01/26 22:51
やぎの外注できます?

31 :名無しゲノムのクローンさん:03/02/19 21:03
IgGが欲しいのにIgMしか釣れないのです・・・。
免疫原がproteinでなく細胞のままだと特異性の高いGはとれないって
聞いたんですが、その辺の事知ってる方いません?
って、ここ既に人いなそう(;´д`)

32 :名無しゲノムのクローンさん:03/02/19 23:34
抗体を外注するといくらぐらいかかるものなんでしょうか?


33 :名無しゲノムのクローンさん:03/02/20 00:03
>32
安いところに発注して、血清から抗体生成は自分でやるとすると
ウサギ1羽で80000円。ペプチド合成(抗原)が50000円位。
その他含めて160000円位が底値。

34 :名無しゲノムのクローンさん:03/02/20 22:24
抗原となるポリペプチドなんですけど、分子量どれくらい以上(何アミノ酸以上)
位から、抗原として有効なのかご存じでしたら教えてください。
(キャリアーにつけたりしないで。)
nativeの部分長を発現させて抗原にしようと考えているのですが・・・。

35 :名無しゲノムのクローンさん:03/02/20 22:29
>>31
免疫期間が短すぎってのはない?

>>34
抗原提示細胞は、アミノ酸 6-7 個くらいの分子量の物を提示する。
僕は、アミノ酸 20 個のペプチドから、抗体作った事はあるけど。
正確な境界はわかんないや。

36 :名無しゲノムのクローンさん:03/02/20 22:52
>35
それってキャリアーなしの、20個のポリペプチドですよね?
もっと高分子量じゃないと駄目だと思っていた。ショック。
じゃ、キャリアー付けないで、同じくらいの合成ペプチドでも免疫可能
ですか?

37 :名無しゲノムのクローンさん:03/02/21 01:19
ウサギを使って抗体を作るときですが、
抗原となるタンパクは最低どれくらいの量必要ですか?
本によって必要量が異なっているので、どうしようかと思ってます.
あと、ウサギを飼うときの注意点などありましたら教えて下さい。


38 :>37:03/02/21 01:37
2kgのウサギ>一回に2mgのタンパク質抗原を注射するのが普通。

ヲレの場合、精製タンパク質があまり多く調製できなかったので
毎回20マイクログラム注射してブーストを5ー6回しつこくやったら
非常に良い抗血清がえられた。

39 :名無しゲノムのクローンさん:03/02/21 01:58
20マイクロってのは経験ないが、
一回につき100マイクロあればなんとかなるぞ。
しかもそういうのに限ってなかなかいい抗体だったりする。


40 :名無しゲノムのクローンさん:03/02/21 02:02
ものの本にはウサギに一回に5マイクログラムづつ注射してもなんとかなったそうだ。
ただし、そこまで少ないのならマウスに抗原を注射したほうが良い。

41 :名無しゲノムのクローンさん:03/02/21 02:23
ウサーギに免疫してる時、あまりに暴れるから強めに押さえたら、けーついだっきゅーしたよ いや〜 マウスにはした事あるがウサーギが堕ちて逝くとは思わなんだ

42 :37:03/02/22 00:42
自分も抗原タンパクを多量に精製できなかったので困っていたのです。
一回につき100マイクロは用意できるので、トライしてみようと思います。
ありがとうございました。

43 :31:03/02/24 21:03
書き込みが増えてる〜!抗体作製仲間がいるって嬉しいですね。

>>35
免疫は隔週で6〜7回、3ヶ月以上掛けてます。(マウス)
免疫細胞数は十分なはず。
血清ではGもMも抗体価が上がってるのに何故なんだろう・・・。

44 :名無しゲノムのクローンさん:03/03/04 16:57
作った抗体は、どの程度のグレードまで精製してます?

45 :山崎渉:03/03/13 13:45
(^^)

46 :山崎渉:03/03/13 13:54
(^^)

47 :山崎渉:03/04/17 09:55
(^^)

48 :山崎渉:03/04/20 04:03
   ∧_∧
  (  ^^ )< ぬるぽ(^^)

49 :名無しゲノムのクローンさん:03/05/18 01:56
最近、抗原として組換えタンパクを発現させた細胞を
打つという系もあるということを聞きました。
どなたかこの系で抗体作りをやっれている方はいますか?


50 :名無しゲノムのクローンさん:03/05/18 08:15
膜タンパク質に対するモノクロを取るときには昔から使われているよ。私も10年くらい前にやりました。transfectantを取るところまでで、免疫は人任せだったけど。

51 :名無しゲノムのクローンさん:03/05/18 16:09
抗原タンパク質をグルタルアルデヒド処理して抗原性を上げてから注射するのは普通の方法なんですか?

52 :山崎渉:03/05/21 21:47
━―━―━―━―━―━―━―━―━[JR山崎駅(^^)]━―━―━―━―━―━―━―━―━―

53 :山崎渉:03/05/28 14:56
     ∧_∧
ピュ.ー (  ^^ ) <これからも僕を応援して下さいね(^^)。
  =〔~∪ ̄ ̄〕
  = ◎――◎                      山崎渉

54 :名無しゲノムのクローンさん:03/05/30 19:12
SDS-PAGEでバンドを切り出してそのタンパクを回収することは可能ですか?

55 :名無しゲノムのクローンさん:03/05/30 19:18
簡単です。
ゲルを透析チューブにいれて、チューブ中にSDS-PAGEサンプル液を入れ、
外液をSDS-PAGE泳動用緩衝液として、MUPIDで100V電圧をかけ2-3時間放置。
溶出後、チューブ内の液を適当な緩衝液で透析すれば終了。必要なら濃縮する。

56 :名無しゲノムのクローンさん:03/05/30 19:28
>>55
ありがとうございます。
ちなみにその収率はどの程度ですか?

57 :名無しゲノムのクローンさん:03/05/30 20:03
収率50-80%
CBB染色したタンパク質の色素を抜くには、上に書いたレシピの透析後にアセトン沈殿するといい。

58 :名無しゲノムのクローンさん:03/05/30 21:41
「罪と罰と北斗」のゲーム、皆さんもやりませんか?
http://cgi29.plala.or.jp/hokuto01/tumi/index.cgi
以下から、新規登録出来ますので。
http://cgi29.plala.or.jp/hokuto01/tumi/ore_reg.cgi

(注)私は管理人では無く、ただの利用者です。
BGMが時々鳴ります。
討伐で負けた時も、敵が何か喋っていました。

59 :名無しゲノムのクローンさん:03/05/31 00:11
バイトみっけた。1000円もらえるってさ。
http://nigiwai.net/windstorm/


60 :名無しゲノムのクローンさん:03/05/31 11:59
>>55
>>57

SDS-PAGEで切りだしたバンドのタンパクを精製し、
SDSを完全に取り除きたいのですが、そのプロトコルの最後に
アセトン沈殿をすれば可能ですか?

61 :名無しゲノムのクローンさん:03/05/31 15:59
http://elife.fam.cx/


62 :名無しゲノムのクローンさん:03/05/31 18:12
SDSは限界ミセル濃度が高いので10mM Tri-Clとかで
一晩透析すれば抜けるんぢゃないかな。低温でTBSによる透析
とかだと塩濃度が高くて限界ミセル濃度が下がったり、SDSが
析出してくるのでまずい。

63 :名無しゲノムのクローンさん:03/06/02 02:03
>>62
ありがとうございます。
いろいろとアクリルアミドゲルのタンパクからSDSを取り除く方法を
探しているのですが、一般的な方法って何かありますか?

64 :名無しゲノムのクローンさん:03/06/02 02:09
何したいのかわからないが、非変性バッファとかじゃだめなのか?
SDS以外の洗剤もいろいろあるし

65 :名無しゲノムのクローンさん:03/06/02 02:23
>>64
目的は抗体作製用の抗原の精製です。

実際は外注しようと思っているのですが、抗原はゲルから切りだした状態で
構わないらしいのですが、ELISA用にSDSの含まれていない抗原も少量ですが
必要なのです。

それで様々な精製を試した結果、どうしてもピカピカな抗原にならないので
ゲルを切り出すことにしたんですが、ELISA用をどうしようか悩んでます。

66 :動画直リン:03/06/02 02:25
http://homepage.mac.com/hitomi18/

67 :名無しゲノムのクローンさん:03/06/02 16:40
SDS入っててもELISAできると思いますよ。

68 :名無しゲノムのクローンさん:03/06/02 16:43
SDSはいっててもELISAできますよ。

69 :名無しゲノムのクローンさん:03/06/02 17:22
>>67-68
ありがとうございます。
しかし、業者の方で完全にSDSを抜いてほしいとの事ですので、
なんとかならないでしょうか。
未だに探しております。

70 :69:03/06/02 19:02
解決しました。
アセトン沈殿でSDSは取り除けることがわかりました。
どうもありがとうございました。

71 :名無しゲノムのクローンさん:03/06/03 12:11
>>55

質問なんですが、SDS-PAGEサンプル液は
CBBが入ったままで使うのでしょうか?

72 :71:03/06/03 12:25
CBBではなくBPBですた。
スマソ。

73 :山崎 渉:03/07/12 12:55

 __∧_∧_
 |(  ^^ )| <寝るぽ(^^)
 |\⌒⌒⌒\
 \ |⌒⌒⌒~|         山崎渉
   ~ ̄ ̄ ̄ ̄

74 :山崎 渉:03/07/15 12:50

 __∧_∧_
 |(  ^^ )| <寝るぽ(^^)
 |\⌒⌒⌒\
 \ |⌒⌒⌒~|         山崎渉
   ~ ̄ ̄ ̄ ̄

75 :なまえをいれてください:03/07/24 17:31
ハッキリ言ってアメリカなどの多民族国家では黒人の方がアジア人よりもずっと立場は上だよ。
貧弱で弱弱しく、アグレッシブさに欠け、醜いアジア人は黒人のストレス解消のいい的。
黒人は有名スポーツ選手、ミュージシャンを多数輩出してるし、アジア人はかなり彼らに見下されている。
(黒人は白人には頭があがらないため日系料理天などの日本人店員相手に威張り散らしてストレス解消する。
また、日本女はすぐヤラせてくれる肉便器としてとおっている。
「○ドルでどうだ?(俺を買え)」と逆売春を持ちかける黒人男性も多い。)
彼らの見ていないところでこそこそ陰口しか叩けない日本人は滑稽。

76 :名無しゲノムのクローンさん:03/07/27 18:58
    ___ 抗体ツクル! ___   イジメチャ
   C ゜∀ノ         ヽд・ 〇   イケナイヨ
   ι   っ$:> チュウ‥  ο ι|
〜〜(___) U_      (____)〜〜

77 :名無しゲノムのクローンさん:03/08/01 09:49
無料で抗体作りますとか、たまに見かけるけど、どう?

78 :ぼるじょあ ◆yBEncckFOU :03/08/02 02:56
     ∧_∧  ∧_∧
ピュ.ー (  ・3・) (  ^^ ) <これからも僕たちを応援して下さいね(^^)。
  =〔~∪ ̄ ̄ ̄∪ ̄ ̄〕
  = ◎――――――◎                      山崎渉&ぼるじょあ

79 :山崎 渉:03/08/15 19:09
    (⌒V⌒)
   │ ^ ^ │<これからも僕を応援して下さいね(^^)。
  ⊂|    |つ
   (_)(_)                      山崎パン

80 :名無しゲノムのクローンさん:03/08/23 17:56
ウサギでポリクロを作らせる外注先として、お薦めはどこでしょうか。
2羽で13万円〜28万円と、価格にも随分バラつきがあるのですが、やはり高いところが良いのでしょうか。
大手試薬メーカーに頼むと、下請けに出すから結局小さなところと同じという噂も聞きます。
皆さんのご経験をお聞かせください。

81 :名無しゲノムのクローンさん:03/08/24 00:19
ケアリー 激安 最強
http://www.keari.co.jp/antibody.html


82 :名無しゲノムのクローンさん:03/08/24 12:03
うゎ! 値段だけだと確かにブッチ切りで安いけど、ホントに大丈夫?

83 :名無しゲノムのクローンさん:03/08/24 12:19
モノクロはさすがに高いんだなあ

84 :名無しゲノムのクローンさん:03/08/24 13:30
ケアリーを利用したヤシの感想きぼんね。

85 :名無しゲノムのクローンさん:03/08/25 23:05
>>81 は利用した経験あんの?

86 :名無しゲノムのクローンさん:03/12/29 20:14
MBLを薦める。>>80

FBIの圧力にも耐えた(w

87 :名無しゲノムのクローンさん:03/12/31 00:16
外へ出るたびに嫌なこと不快な気分を強制される
とりわけゴミマンカスどもからな
死ね!ガソリンと精子をぶっかけて焼殺してやる
己の罪深さを思い知れ
愚民マンカスども全てを殺し尽くしてやる
死ね死ね死ね死ね死ね死ね死ね死ね死ね死ね死ね死ね死ね死ね死ね死ね死ね!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!

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